自動(dòng)進(jìn)樣器在色譜分析儀器中有著廣泛應(yīng)用,液相色譜系統(tǒng)大多使用自動(dòng)進(jìn)樣器引入樣品?,F(xiàn)在的色譜實(shí)驗(yàn)室,大都使用六通進(jìn)樣閥或自動(dòng)進(jìn)樣器。進(jìn)樣裝置要求:密封性好,死體積小,重復(fù)性好,保證中心進(jìn)樣,進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。HPLC進(jìn)樣方式可分為:隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣、自動(dòng)進(jìn)樣。
1、隔膜進(jìn)樣
用微量注射器將樣品注入專門設(shè)計(jì)的與色譜柱相連的進(jìn)樣頭內(nèi),可把樣品直接送到柱頭填充床的中心,死體積幾乎等于零,可以獲得的柱效,且價(jià)格便宜,操作方便。但不能在高壓下使用(如10MPA以上);此外隔膜容易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應(yīng),使進(jìn)樣重復(fù)性只能達(dá)到1~2%;加之能碉各種溶劑的橡皮不易找到,常規(guī)分析使用受到限制。
2、停流進(jìn)樣
可避免在高壓下進(jìn)樣。但在HPLC中由于隔膜的污染,停泵或重新啟動(dòng)時(shí)往往會(huì)出現(xiàn)“鬼峰”;另一缺點(diǎn)是保留時(shí)間不準(zhǔn)。在以峰的始末信號(hào)控制餾分收集的制備色譜中,效果較好。
3、閥進(jìn)樣
一般HPLC分析常用六通進(jìn)樣閥(以美國(guó)RHEODYNE公司的7725和7725I型常見),其關(guān)鍵部件由圓形密封墊子(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。由于閥接頭和連接管死體積在存在,柱效率低于隔膜進(jìn)樣(約下降5~10%左右),但耐高壓(35~40MPA),進(jìn)樣量準(zhǔn)確,重復(fù)性好(0.5%),操作方便。
六通閥進(jìn)樣方式有部分裝液法和*裝液法兩種。①用部分裝液法進(jìn)樣時(shí),進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%(多75%),并要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同。此法進(jìn)樣的準(zhǔn)確度和重復(fù)性決定于注器取樣的熟練程度,而且易產(chǎn)生由進(jìn)樣引起的峰展寬。②用*裝液法進(jìn)樣時(shí),進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的 5~10倍9少3倍),這樣才能*置換定量環(huán)內(nèi)和流動(dòng)相,消除管壁效應(yīng),確保進(jìn)樣的準(zhǔn)確度及重復(fù)性。
六通閥使用和維護(hù)注意事項(xiàng):①樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45UM濾膜過濾,以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。②轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢,更不能停留在中間位置,否則流動(dòng)相受阻,使泵內(nèi)壓力劇增,甚至超過泵的大壓力;轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí),過高的壓力將使柱頭損壞。③為防止緩沖鹽和樣呂殘留在進(jìn)樣閥中,每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通??捎盟疀_洗,或先用能溶解樣品的溶劑沖洗,再用水沖洗。
4、自動(dòng)進(jìn)樣
用于大量樣品的常規(guī)分析。
液相自動(dòng)進(jìn)樣器做為客戶使用來說較關(guān)注的問題是:
1.定量是不是準(zhǔn)確。現(xiàn)在方法驗(yàn)證特別多,基本都是外標(biāo),所以進(jìn)樣準(zhǔn)確那是必須滴。
2.定位準(zhǔn)確。反復(fù)進(jìn)樣,一般半年左右是考驗(yàn)儀器的時(shí)候,半年過去了還那么準(zhǔn)確就說明是經(jīng)的住考驗(yàn)的,還有就是如果瓶子的位置放錯(cuò),放重了,或是沒放,自動(dòng)進(jìn)樣器應(yīng)該有足夠的應(yīng)對(duì)出錯(cuò),經(jīng)過調(diào)整后能依然準(zhǔn)確定位。
3.防殘留設(shè)計(jì)。無論采用什么技術(shù),必須小的殘留,這要在洗針設(shè)計(jì)上下足功夫。
4.價(jià)格。
5.進(jìn)樣速度。簡(jiǎn)捷的進(jìn)樣,快速洗針也要求越來越高。
6.防光照設(shè)計(jì)。
7.易于是清理及擦拭設(shè)計(jì)。
8.配套其它部件的設(shè)計(jì)及價(jià)格。
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