液相色譜有五大系統(tǒng)構成:溶劑輸送系統(tǒng)(脫氣機、高壓泵等)、進樣系統(tǒng)(定量泵、六通閥、定量環(huán)、進樣針等)、分離系統(tǒng)(色譜柱等)、檢測系統(tǒng)(檢測器等)、記錄及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。其中檢測系統(tǒng)常用的檢測器有包括紫外可見吸收檢測器(UVD)、熒光檢測器(FD)、蒸發(fā)光檢測器(ELSD)、示差折光檢測器(RID)、電化學檢測器(ED)、化學發(fā)光檢測器(CD)、質(zhì)譜檢測器(MS)等類型,其技術要求為靈敏度高、噪音低、線形范圍寬、響應快。
1、紫外可見吸收檢測器(UVD):波長范圍190~800mm,190~400mm為紫外區(qū)域,氘燈,400~800mm為可見光區(qū)域,鎢燈。其特點為靈敏度高,小檢測濃度10-9g/ml,線性范圍寬,對溫度和流速不敏感,可進行梯度洗脫,應用范圍廣。適用于帶有共軛基團的化合物,為常用的檢測器。
2、熒光檢測器(FD):氘燈作激發(fā)光源,波長范圍250~600nm。其特點為靈敏度更高,檢測限10-12~10-13g/ml(靈敏度比UV檢測器高2~3個數(shù)量級),選擇性好,對溫度和流速不敏感,可進行梯度洗脫,所需試樣量少,適于痕量分析,應用于組分吸收一定波長紫外光后發(fā)射熒光的物質(zhì),且熒光強度與濃度成正比。
3、蒸發(fā)光檢測器(ELSD):是一種通用型的檢測器,可檢測揮發(fā)性低于流動相的任何樣品,而不需要樣品含有發(fā)色基團。蒸發(fā)光散射檢測器靈敏度比示差折光檢測器高,對溫度變化不敏感,基線穩(wěn)定,適合與梯度洗脫液相色譜聯(lián)用。被廣泛應用于碳水化合物、類脂、脂肪酸和氨基酸、藥物以及聚合物等的檢測。其主要缺點為響應值與濃度不呈線性,需取響應值的對數(shù)與濃度計算線性。
4、示差折光檢測器(RID):是一種連續(xù)檢測樣品流路與參比流路間液體折光指數(shù)差值的通用型檢測器,其優(yōu)點為對糖類檢測靈敏度較高,其檢測限可達10-8g/ml;穩(wěn)定性好,操作方便,缺點該檢測器對多數(shù)物質(zhì)的靈敏度低(約10-5g/ml),通常不用于痕量分析;受環(huán)境溫度、流動相組成等波動的影響較大,不適合梯度洗脫。
5、質(zhì)譜檢測器(MS):將樣品中的分析物電離,不同質(zhì)量離子在電場或磁場中,將按其質(zhì)量和所帶的電荷比(質(zhì)荷比,m/z)進行的分離和排序,根據(jù)質(zhì)荷比的大小和相對強度形成規(guī)則的質(zhì)譜,從而對物質(zhì)進行結構鑒別和定量分析。質(zhì)譜分析具有靈敏度高,樣品用量少,分析速度快,分離和鑒定同時進行等優(yōu)點,但流動相中不能含有無機鹽。